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《生物化学实验》教案 蛋白质的呈色反应
教学目的和要求
1、了解构成蛋白质的基本成分及主要连接方式；
2、呈色反应的基本原理； 教学内容纲要凡含有两个或两个以上肽键的物质，在碱性溶液中双缩脲与铜离子作用生成紫红色化合物肽键的数目不同，产生双缩脲反应的颜色也不完全相同，在淡红色与紫红色之间一切蛋白质都有双缩脲反应
4凡含有游离a-氨基酸的蛋白质，胨，多肽及氨基酸（脯氨酸及羟脯氨酸除外）均可在中性溶液中与茚三酮共热呈现兰紫色反应，即茚三酮反应
思考题：
举例几种代表性的蛋白质呈色反应？
主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：
学时《生物化学实验》教案 蛋白质的变性、沉淀、凝固
教学目的和要求
1、了解观察各种理化因素对蛋白质性质的影响
2、分析和掌握变性、沉淀、凝固之间的联系和差别。教学内容纲要
1、重金属盐类（铅、铜、银、汞等盐类）可与蛋白质的游离羟基生成不溶的蛋白盐沉.2、蛋白质溶液加热，增加分子碰撞，当分子动能达到凝固温度临界值时，其冲动力使键断裂破坏分子内部立体构型，而失去天然蛋白质的性质，溶解度减小，而形成不可逆的沉淀
3、蛋白质水溶液中加酒精至相当浓度时，酒精使蛋白质胶体粒子脱水，从而降低蛋白质在溶液中的稳定性，而产生沉淀，若迅速加水，稀释减低酒精浓度，沉淀可复溶。但如酒精接触时间过长，引起蛋白质变性，则沉淀不能复溶。思考题：
蛋白质变性的主要原因有哪些？
主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：
学时《生物化学实验》教案
蛋白质的两性反应和等电点的测定
教学目的和要求
1、学习了解蛋白质两性解离性质。
2、掌握测定蛋白质等电点的方法。教学内容纲要蛋白质由氨基酸组成，虽然大多数的氨基与羧基以肽键结合，但总有一定数量自由的氨基和羧基，以及酚基、巯基、咪唑基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样是两性解离电质。调节溶液的PH，使蛋白质所带正负电荷数相等，净电荷为零，以兼性离子存在，此时溶液PH为蛋白质的等电点。思考题：
等电点测定的方法有哪些？
主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：
学时
《生物化学实验》教案 温度、PH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响，怎样鉴定淀粉酶具有
专一性 教学目的和要求
1、了解酶的高效性、特异性及温度、PH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响。
2、了解抑制剂的特殊性质和应用等。教学内容纲要
1、证明淀粉酶是具有底物特异性的酶，只能作用特异的底物---淀粉，淀粉酶活性大小可以用反应速度来表示，酶促反应速度受到多种因素的影响。
2、酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。
3、反应速度达到最大值时的温度称为某种酶作用的最适温度，高于或低于此温度，均使酶的活性下降。思考题：
唾液淀粉酶的作用是什么？ 主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：4 学时《生物化学实验》教案 血清中蛋白质含量的测定
（一）教学目的和要求
1、掌握血清蛋白质含量的双缩脲法测定的原理和方法
2、了解掌握分光光度计的使用方法及检测方法。教学内容纲要
1、双缩脲在碱性溶液中能与铜离子作用，生成紫红色化合物，蛋白质分子中含有许多肽键，与双缩脲类似，也能与双缩脲试剂作用，产生颜色反应，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。
2、血清蛋白含量测定方法
3、血清中蛋白测定的应用 思考题：
血清中含有哪些蛋白？
主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：2 学时《生物化学实验》教案 血清中蛋白质含量的测定
（二）教学目的和要求
1、掌握血清蛋白质含量的考马斯亮蓝染色法的原理和方法
2、了解掌握分光光度计的使用方法及检测方法。教学内容纲要
1、考马斯亮蓝（Coomaie Brilliant Blue）测定蛋白含量存在着两种不同颜色形式，红色和蓝色。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465nm变成596nm。在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’s law），因此可以通过测定染料在595nm处光吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。本法测定范围为10～100μg蛋白质。
2、标准曲线的绘制方法
3、蛋白检测的测定精度 思考题：
BCA方法的基本原理？
主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：2 学时《生物化学实验》教案 血清中葡萄糖含量测定
教学目的和要求
1、了解血糖的来源和去路，影响血糖的因素。
2、掌握分光光度法进行血糖含量测定的标准曲线法。教学内容纲要
1、葡萄糖在加热的有机酸溶液中能与某些芳香族胺类，苯胺，联苯胺，邻甲苯胺等生成有色衍生物
2、利用葡萄糖在醋酸溶液中脱水后，与邻甲苯胺缩合，生成青色的Schiff碱 思考题：
邻甲苯胺溶液配置方法是什么？ 主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：4 学时《生物化学实验》教案 血清中胆固醇含量的测定
教学目的和要求
1、掌握血清中胆固醇检测的原理和方法
2、了解掌握醋酸酐法和邻苯二甲醛法比色法等检测方法。教学内容纲要
胆固醇的测定临床常用的比色法有两类：
1、固醇化的氯仿式醋酸溶液中加入醋酸酐-硫酸试剂，产生蓝绿色。
2、固醇的醋酸、乙醇式异丙醇溶液中加入高铁-硫酸试剂产生紫红色。由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其倔因素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。实验采用醋酐-硫酸单一试剂显色法。本法测定100ml血清总胆固醇的正常值为125~200mg。
醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结合生成绿色化合物。
胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm有最大吸收，可用比色法定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL之内于吸光度呈良好的线性关系。本法优点是操作简便（无需将样品中的胆固醇抽提出来获去除样品中的蛋白质），灵敏稳定。
3、蛋白检测的测定精度 思考题：
胆固醇可以转化为哪些生理活性物质？
胆固醇合成的限速酶是什么？ 主要参考书：
陈毓荃《生物化学实验方法和技术》，科学出版社，2002
赵永芳《生物化学技术原理及应用》（第三版），科学出版社，2002 实验学时：4 学时
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