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土源性线虫病监测方法
一、监测对象
各监测点年龄在3周岁(含3周岁)以上的常住人口,外来人口居住满一年以上者。常住人口外出6个月以上者除外。
二、监测时间 9月~12月
三、检查方法采用改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法)进行病原学检查。2 3~12周岁儿童加做透明胶纸肛拭法检测蛲虫卵。
(一)、改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法)操作步骤 1 材料的准备
1.1 塑料定量模板(统一供应):规格为30mm×40mm×1mm的聚苯乙烯模板,中央孔为圆台形,其短径3mm,长径4mm,高1mm,容积为38.75mm3;
1.2 软性塑料刮片(统一供应):两头刮片型;
1.3 尼龙绢片(统一供应):规格为80~100目,裁剪成8cm×8cm大小; 1.4 透明液的配制:取100ml蒸馏水、100ml纯甘油、3%的孔雀绿(或亚甲蓝)1ml,按此比例混合均匀;
1.5 亲水性透明玻璃纸(统一供应):规格为30mm×25mm、厚40µm,使用前需在透明液中浸泡24小时以上,使玻璃纸显示绿色或蓝色;
1.6 载玻片:规格为75mm×25.5mm,厚1.0mm~1.2mm;
1.7 其它:原始登记表、镊子、剪刀、记号笔、标本盒、吸水纸、光学显微镜和一次性手套等。操作步骤
2.1 编号:每份粪样取1张载玻片进行编号(与待检粪样的编号相同); 2.2 打开待检粪样的包装,将尼龙绢片置于待检粪样上,用塑料刮片轻压尼龙绢片并在其上轻刮,使细粪渣透过尼龙绢片的微孔滤出至绢片表面;
2.3 将定量板放在载玻片中部,然后用刮片将绢片表面的细粪渣填入定量板的中央孔内,使填满全孔并抹平;
2.4 小心移去定量板,使粪样留在载玻片上;
2.5 取一张浸泡好的亲水玻璃纸,抖掉多余的浸泡液,盖在粪样上,用橡皮塞或另一块较厚的载玻片覆于玻璃纸上垂直均匀用力压制,使粪便均匀地展开至玻璃纸边缘;
2.6 待粪便透明后及时镜检。3 结果观察
3.1将透明后的加藤片置于光学显微镜的载物台上,在低倍(10×)镜下进行镜检。镜检时仔细检查每一视野,并特别注意受精蛔虫卵与未受精蛔虫卵的鉴别。
3.2虫卵计数方法
每张涂片发现的蛔虫卵、鞭虫卵、钩虫卵、其他吸虫卵都要计数。镜检所用显微镜统一目镜为10×的镜头。由于一些地区蛔虫感染度特别重,有时一张涂片虫卵数达数千甚至数万个,计数蛔虫卵比较费时,为此对蛔虫卵计数作以下规定:每张涂片首先随意粗查几个视野,若每个视野蛔虫卵数在10个以上,可以暂不计数蛔虫卵。先读完全片各视野的钩虫卵数和鞭虫卵数等,再用定视野抽查法推算全片蛔虫卵数。具体步骤是:
3.2.1按下图分布固定抽查10个视野,并算出抽查的10个视野蛔虫卵总数;
10个视野分布图
3.2.2计算出该涂片粪膜视野数,再推算出全片蛔虫卵数。
按一定的规律,如自左而右,自上而下,再自右而左,一行接一行,一个视野接一个视野地用推行器移动涂片,数出全片粪膜视野数,则:
全片粪膜蛔虫卵总数=抽查的10个视野蛔虫卵数之和×全片粪膜视野数÷10 例:抽查的10个视野蛔虫卵数相加为366,全片粪膜视野数为78,则: 全片粪膜蛔虫卵总数=366×78÷10=2854.8≈2855
3.3 结果登记
观察的结果即时记录在原始登记表上,并及时转登附表1。4 注意事项
4.1亲水性透明玻璃纸:使用前需全部浸入透明液中,浸泡24小时以上。4.2把刮片上的细粪渣填入定量板时,必须填满中央孔全孔并抹平;压制涂片时尽量使粪便均匀展开至玻璃纸边缘,但应避免粪渣溢出。
4.3涂片放置时间长短是确保镜检质量的关键。一般室温25℃、75%湿度以下,涂片放置时间不宜超过2小时;若温度低,空气湿度大,涂片放置时间可适当延长。总之,涂片放置时间取决于粪样透明度,只要透明了,就应及时镜检,否则透明过渡,薄壳虫卵易变形看不清楚,会造成漏检或误判。
4.4 用椭圆孔塑料定量板,每孔所容粪便重量平均41.7mg,每片所得虫卵数乘以24,即得每克粪便的虫卵数。粪检时每片虫卵数不必乘24,填在附表1的数值为实际数的虫卵数(不乘24)。
4.5 粪样一送三检,三片全计数后取平均值。
(二)透明胶纸肛拭法操作步骤 1 材料
牛皮纸(或聚乙烯塑料薄膜)、市售透明粘性胶带纸(宽约2.6cm)、载玻片、小纸袋。步骤
2.1将牛皮纸(或聚乙烯塑料薄膜)剪成长10cm、宽8cm,在中央剪一个直径2.4cm圆形孔。(略大于1元钱硬币);
2.2用透明胶带纸补贴圆形孔;
2.3再把载玻片盖在胶带纸上(保护胶面),装入纸袋中,纸袋外面写上受检者姓名、年龄、性别和编号;
2.4检查时,取下载玻片,将有胶的一面在肛周粘压后,覆回载玻片装入纸袋,带回实验室镜检。
附:常见虫卵图像
受精蛔虫卵(直接涂片中)
(Kato-Katz厚涂片中)
未受精蛔虫卵和受精蛔虫卵(直接涂片中)
(Kato-Katz厚涂片中)钩虫卵(直接涂片中)
(Kato-Katz厚涂片中)
鞭虫卵(直接涂片中)
(Kato-Katz厚涂片中)
蛲虫卵(直接涂片中)
(Kato-Katz厚涂片中)
(透明胶带纸下)
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