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菊花的组织培养实验设计
实验名称 年级、组 组 员菊花的组织培养实验设计 2012级10班 第5组
杨素华、叶利萍、佐尚秀
李定峰、欧 霞、刘新鹏
刘昌恒、颜政委、李元凤
2014年12月6日
菊花的组织培养实验设计
一 实验目标
1.掌握植物组织培养的原理。
2.学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。
二 实验原理
植物组织培养主要利用了植物细胞的全能性，在适宜的条件下，细胞具有形成一个新的个体的潜在能力。细胞全能性(totipotency)就是指每个生活的细胞中都包含有产生一个完整机体的全套基因.植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。
三 实验材料
1.实验设施
培养基制备、灭菌和材料处理室、高压灭菌锅、无菌接种室、组织培养室、水浴锅、超净工作台或简易接种箱、2.实验仪器
解剖刀、三角烧瓶（100mL）、烧杯、量筒、锥形瓶、容量瓶、移液管、培养皿、封口膜、棉线、分析天平、长镊子、剪刀、牛皮纸、圆滤纸。
3.实验材料
在晴天，最好是中午或下午采集无病毒、无病害、生长良好的，易于诱导的未开花的菊花植株茎上部新萌生的侧枝为组织培养材料。
4.实验试剂
准备制备MS培养基、乙醇、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、氯化汞（升汞）或次氯酸钠、琼脂、6-苄基氨基腺嘌呤（6-BA）、吲哚乙酸（IAA）或2,4-D（生长素类似物）、萘乙酸（NAA）及蔗糖
四 实验的具体操作过程
1.配置培养基
（1）愈伤组织诱导培养基：MS培养基（蔗糖含量为10g/L，2，4–D含量为2mg/L，琼脂10g/L）。
（2）试验培养基：在MS培养基中加入IAA和6–BA。吲哚乙酸（IAA)先用少量0.1mol/LNaOH溶解，6-苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/LHCl溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。
2.灭菌 待灭菌的物品有：培养基、装有滤纸的培养皿等
具体灭菌步骤是：先将蒸馏水装入1000mL锥形瓶的3/4处，用封口膜和牛皮纸两层封口，再将装有滤纸的培养皿包起来，然后，连同已配置好的培养基一起放入高压灭菌锅内，在1.2个大气压下灭菌 10~15min，冷却后备用，注意灭菌时间不得超过15min，以免培养基变性。
3.组培材料的灭菌 4.接种
无菌接种前：用70％的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯控制下进行，器械使用前后都要用火焰灼烧灭菌。
接种操作：插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体，接种后将封口膜重新扎好，后送进组培室。
5.培养：应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，温度控制在18~22摄氏度，相对湿度应保持在60%~70%，每天应保证至少12h的光照，光照强度约为1500Lx，也可使用自然光。根长>1cm时，可出瓶移栽。
6.移栽与栽培：移栽前，打开封口膜，在培养间生长几日；移栽时候，用流水将依附于小苗根部的培养基洗净，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。
五 注意事项
1.材料的选择与处理
尽量选择未开花植株的茎上部分新萌生的侧枝，带菌少，易诱导。外植体消毒要足够，减少外植体自身带菌造成的误差
2.控制好培养条件
接种时全程无菌操作，温度控制在18-22摄氏度，不宜过高伤害外植体，PH在5.8左右。
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