生化试验思考题总结_生化考试的实验思考题

其他工作总结 时间:2020-02-27 22:48:41 收藏本文下载本文
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Shaonanlee 黑暗舞者DID 生化实验思考题总结

1.蛋白质定量测量的方法有哪些?简要说明其原理。

答:a.紫外吸收,在280nm处有最大吸收峰。

b.定氮法,利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。

c.分光光度计法,利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。d.双缩脲法。也是利用显色反应。e.Folin酚法。

2.如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质,在各蛋白质分子量已知的情况下,如何判断哪一种蛋白质时所想要的?

答:现在假设有三种蛋白质a b c,分子质量a>b>c。

那么,a最先流出,在体积V1处有一个洗脱体积,对应的a的溶液浓度在 V1处也最高,就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值,对应不同的洗脱体积,就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b,那么在第 二个吸收峰的时候,找到相应的洗脱体积,然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。

3.如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳,对其结果有何影响?

答:如果没有去除清蛋白里面的盐分,则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子

强度太大,蛋白质表面的电荷减少,所以导致电泳速度下降,甚至无法泳动。

4.对电泳所得的结果如何进行定量分析?

答:将电泳完毕的样品(凝胶),按条带宽度的分布剪下,分别把每个小块样品

用NaOH溶液漂洗,再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。

Shaonanlee 黑暗舞者DID

5.使SDS-PAGE具有高分辨率的三个因素是什么?

答:浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。

6.实验所得的各点数据中,哪些易出现较大的误差?

答:有两个点。第一个,在三十秒的点,反应速度太快,时间如果掌握不准,容易

出现误差。另一个,在3min的点,反应速度很慢,斜率小,则倒数大,所以 时间掌握不好,也容易出现大误差。

7.假如把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍,实验方案该如何修改?

答:把底物和酶的浓度都降低。

8.请举出三种提取质粒的方法,并简要说明其中一种方法的原理。

答:碱裂解(要求原理,书上有);一步法(见书上46,47页有关TELT试剂的内容)

;SDS法;煮沸法。

9.分析质粒DNA切割不完全的原因。

答:a.质粒因素:碱裂解时间太长,无法复性;乙醇挥发不完全,影响酶的活性。

b.酶的因素:酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。

c.酶切体系:温度不是最适温度;时间不够长;缓冲溶液的问题。

10.分析酶切后没有观察到目的DNA的原因。

答:a.重组失败。

b.酶切失败。

c.目的基因量太少。

11.从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果?

答:假阳性就是出现了不该出现的条带。

a.防止污染,例如模板的污染。b.引物设计合适,保证特异性。c.控制反应条件。

d.必要时,要减少循环次数。

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