转化方法和酵母质粒抽提（材料）由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“酵母质粒提取”。
酵母转化（快速）
侯昕
1、挑单菌落于3ml 2XYPAD培养基中，30°C 200rpm培养至菌浓度为2X108 cell/ml。（约18h）。
2、用1.5ml离心管收集菌液两次，每次1ml，13500rpm，常温离心30秒。3、4、2mg/ml carrier DNA变性，100°C 5分钟，置冰上备用。在菌中依次加入
50％PEG3350
240ul
1M LiAc
34ul 2mg/ml S.S.carrier DNA
50ul plasmid DNA(各1ug)
36ul 每加入一种后，要吸打混匀。5、6、42°C水浴1－3小时。
13500rpm离心1分钟，吸弃上清。沉淀中加500ul水，吸打均匀，100ul涂皿。
7、30°C培养两天
此方法可用于已知蛋白互做检测，将两个质粒共转化。
2×YPAD：Yeast Extract
16g
2mg/ml carrier DNA：
Peptone
32g
鲑鱼精DNA（Sima D1626）
Glucose
32g
溶于水，低温放置过夜，灭
Adenine hemisulfate
80mg
菌后－20°C保存。
d2 H2O
800ml 酵母转化（高效）
侯昕
1、挑酵母单菌落于100ml SC液体培养基中，30°C，200rpm摇至菌浓度为2X107 cell/ml（稀释20倍，OD545或OD600为0.1）。※或挑酵母单菌落于50ml 2XYPAD液体培养基中，30°C，200rpm摇至菌浓度为2X108cell/ml（稀释200倍，OD545或OD600为0.1）。
2、用两个50ml离心管分别收集40ml菌液，3000g，常温离心5分钟。
3、将菌分别转入两瓶150ml 2XYPAD培养基中，扩大培养至菌浓度为2X107cell/ml。
4、用500ml离心管收集300ml菌液，3000g，5分钟。用 200mlddH2O洗两次，将菌转入一个50ml离心管。
5、2mg/ml carrier DNA变性，100°C 5分钟，置冰上备用。
6、配Mixture：
50％PEG3350
14.4Mml
1M LiAc
2.16ml 2mg/ml S.S.carrier DNA
3ml plasmid DNA＋ddH2O
2.04ml7、把Mixture加入菌沉淀中，吸打均匀。
8、42°C水域热激45分钟；每5分钟摇一下，使其受热均匀。
9、3000g，离心5分钟，弃上清，菌沉淀中加40ml水，吸打均匀，涂皿，100－200u/皿。
此方法可用于酵母双杂交文库筛选，建议分步转化。
酵母质粒抽提
侯昕
1、收集菌液，10000g，离心10秒。
2、菌沉淀中加200ul YLS，牙签打散。
3、加200ul 苯酚氯仿异戊醇（25：24：1），摇5分钟，13000rpm，离心5分钟。
4、将上层转入一新离心管中，重复3。
5、将上层转入一新离心管中，加20ul 3M NaOAc（pH5.2）、500ul乙醇，摇匀，10000g，4°C离心10－30分钟。
6、750ul 75％乙醇洗，10000g，离心5－10分钟。
7、重复6。
8、吹干，加10－20ul 水或TE。
此方法得到的质粒可用于电转大肠杆菌
Yeast lysis solution（YLS）：
2％（v/v）
Triton X－100
1％（w/v）
SDS 100mM
NaCl 1mM
EDTA
这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 /25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。让我们先来看看溶液I......
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