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微生物质量控制盲样结果分析
提高微生物检验人员的技术水平，使检验结果准确可靠。方法 参加省一级质量控制盲样考核，从10g奶粉中检出1～3种致病菌，并对结果进行分析。结果从样品中检出沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌各1株，通过比对，正确率100%。结论本实验室检验技术水平进一步得到了提高。
为提高微生物室检验质量，在做好实验室内部质量控制的同时，每年都积极参加全省卫生检测检验实验室间的质量控制。现将2010年本实验室参加河南省疾控中心对地市级实验室进行室间质量控制考核的结果分析如下。
1、材料与方法
1.1 质控样品塑料管包装10g奶粉，本底清楚，不含有目标微生物，混合一定量的1～3种致病性细菌纯培养物。
1.2 检验要求鉴定到种或属。
1.3 检测标准按GB 4789-2010.4、GB 4789-2010.10、GB 4789-2010.30、GB 4789-2010.40中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验方法[1]。
1.4 检验试剂营养琼脂、营养肉汤、增菌培养基、分离培养基、TSI等生化试剂由环凯科技有限公司提供，VITEK32鉴定卡由法国梅里埃生物有限公司提供，显色培养基由博赛生物技术股份有限公司提供。
1.5 方法：
1.5..1 样品处理、增菌将10g奶粉以无菌方式倒入100ml无菌生理盐水中，充分混匀。各吸取25ml分别加入225 ml7.5%NaCl肉汤、LB1、BPW、BPW中。LB1经300C24h培养后吸取0.1ml转入10ml LB2中培养，其中1份BPW经360C、12h培养后吸取1ml转入10ml TTB中增菌，另1份BPW经360C、18h培养后吸取1ml转入10ml mLST-Vm中增菌。
1.5.2 划线分离7.5%NaCl肉汤增菌液经360C、24h培养后划线于金黄色葡萄球菌显色平板，LB2增菌液经360C、24h培养后划线于单核细胞增生李斯特菌显色平板，TTB增菌液经360C、24hr培养后划线于沙门菌显色平板，mLST-Vm增菌液经440C、24h培养后划线于阪崎肠杆菌显色平板。结果
2.1菌落生长情况显色平板经360C、24h培养后观察结果，沙门菌显色平板上有红色可疑菌落生长，阪崎肠杆菌显色平板上有蓝绿色可疑菌落生长，单核细胞增生李斯特菌显色平板上有蓝色可疑菌落生长，周围有白色晕环，金黄色葡萄球菌显色平板上没有红色可疑菌落生长。挑取显色培养平板上单个可疑阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌菌落转种营养琼脂经360C、24h培养上VITEK32细菌鉴定仪进行菌种鉴定。
2.2初步生化试验 挑取红色可疑沙门菌转种TSI琼脂斜面，经360C、24h培养后，斜面显红色，底层黄色，产H2S，将菌株转种营养琼脂经360C、24h培养上VITEK32细菌鉴定仪进行菌种鉴定。
2.2染色镜检挑取营养琼脂上可疑沙门菌和阪崎肠杆菌革兰染色镜检，为G-杆菌，挑取营养琼脂上可疑单核细胞增生李斯特菌革兰染色镜检，为G +杆菌。
2.3 外加实验营养琼脂上可疑沙门菌和阪崎肠杆菌氧化酶试验为阴性。
营养琼脂上可疑单核细胞增生李斯特菌做触酶试验为阳性，血浆凝固酶实验阴性。
2.4 菌种鉴定经VITEK32细菌鉴定仪鉴定，检出沙门菌、阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌。
2.5 血清学凝集试验沙门菌多价血清凝集阳性，菌体抗原O9、O12、O1、鞭毛抗原Hg、Hm凝集，为D群肠炎沙门菌。
2.6进一步生化实验将单核细胞增生李斯特菌做进一步生化反应，结果见表1。证实该菌株为单核细胞增生李斯特菌。
表1单核细胞增生李斯特菌进一步生化反应结果
溶血反应 葡萄糖 麦芽糖 MR-VP 甘露醇 鼠李糖 木糖 七叶苷
3讨论
定期对实验室开展质量控制考核是实验室能力验证计划的类型之一，也是计量认证和国家实验室认可的特定要求[2]。通过这次质控考核，使本实验室基本掌握了沙门菌、阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌的检验方法，进一步熟悉了3种致病菌的菌落形态、染色特征和生化特性，为日后的检验工作打下了良好的基础。
实验室质控盲样考核是卫生微生物检验工作质量管理、提高检测检验结果准确可靠的有效手段。目前卫生微生物盲样一般为纯菌种，经过多年的考核锻炼，检验人员基本能够正确检出。但在实际工作比如遇到食物中毒发生时，由于各种杂菌的干扰，致病菌检出的难度会大大增加。怎样提高实际工作中致病菌的检出能力是基层微生物实验室急待解决的问题。本次混合质控盲样的鉴定结果为3种细菌。要求检验人员要有丰富的检验技术能力和强烈的工作责任感，应选择多种增菌液和选择性培养平板进行分离，并多挑一些可疑菌落进行鉴定，避免漏检。[3]
质控试剂与培养基的质量控制是保证检验质量的基础。①要严把进货关，要购买质量合格、质保期内、品质好的培养基；②配制要严格按照实验操作手册与GB4789的规定进行操作。记录配制量、操作者和日期，并于包装上标明使用期限，定期做质量检查，以保证其有效性；③注意培养基和试剂的保存，一般贮存于阴凉干燥处，避免强光直射[4]。参考文献
[1] GB4789-2010 食品安全国家标准食品微生物检验[S].［2］昃向君，编, 实验室认可准备与审核工作指南［M］, 北京：中国标准出版社，2002.89
[3]陆娟，张勃.一份混合菌种质控盲样的鉴定分析[J].中国卫生检验杂志,2008,18（9）：1920-1921.[4] 王润胜，迟秀玲，张妍丽.食品微生物检验的质量控制 [J].预防医学情报杂志,2008, 24
(10)：819-820.
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