有机污染物分析与生物毒性实验的水样采集与前处理由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“生物制品毒性试验”。
有机污染物分析与生物毒性实验的水样采集与前处理
1．仪器与试剂
试剂
二氯甲烷(Dichloromethane)：农残级（美国Fisher Scientific公司）；
甲醇（Methanol）：HPLC级（美国Fisher Scientific公司）；
正己烷（n-Hexane）：农残级（美国Fisher Scientific公司）。
硅胶（60－200目）：超纯（美国ACROS ORGANICS）；
中性氧化铝（50－200目）：（美国ACROS ORGANICS）；
无水硫酸钠：优级纯。
药匙（硅胶柱净化所用）：以二氯甲烷超声清洗15min两次、正己烷超声清洗15min一次。
硅胶在180±2℃、氧化铝在250±2℃分别活化12 h（activate）；待冷却至室温时，称重后装入大口锥形瓶（250或500ml），加入其重量3％的蒸馏水去活性（deactivate），添加过程中应用滴管逐滴加入，边加边用力振摇以防止结块，并超声振荡30 min；放置过夜，平衡后加入正己烷浸没其表面备用（一般也需放置过夜）。
无水硫酸钠经450℃焙烧12 h后置于密封广口瓶中保存备用。仪器与耗材
APFF玻璃纤维滤膜（ф142 mm，孔径0.8~1.2 μm，Millipore）：预先在450℃烘烤3 h，称重记录（较脏水样3~5张为一组，干净水样每张皆需称量，为悬浮物收集所需），蒸馏水浸没保存；
相应的滤膜支架与蠕动泵（Millipore）；
固相萃取装置：SupelcoVisiprepTM DL十二管防交叉污染固相萃取装置；
固相萃取柱：WatersOASIS®HLB固相萃取柱（6 cc、200 mg）；
旋转蒸发仪：BÜCHIRotavaporR-200(瑞士)；
无水真空气泵：美国进口，型号：DOA—P104—BN；
高纯氮气及相应氮吹仪。
所用玻璃仪器均以10％的稀硝酸浸泡过夜，再以重铬酸钾洗液润洗浸泡20 min以上，分别用自来水、蒸馏水冲洗干净，在烘箱中110℃烘干；
所用塑料器皿均以10％的稀硝酸浸泡过夜，再分别用自来水、蒸馏水冲洗干净，倒置
12．样品的采集与过滤水样采集
采样瓶采用10 L容量的棕色带塞细口玻璃瓶，样品瓶经重铬酸钾洗液润洗浸泡20 min以上，以自来水、蒸馏水洗净后倒置晾干，待用。
污水、地表水每个样品采集30L，饮用水每个样品采集45 l。样品运回实验室后如不立即处理需4℃下保存；在存放样品时，应尽量注意存放在没有有机气体干扰的区域，以免交叉污染。所采集样品应在2日内过滤完毕，7日内富集完毕。挥发性有机物采集
采样瓶选用40mL带有聚四氟乙烯密封垫的螺口玻璃瓶，洗净烘干。采样时先用预采集的水样荡洗两三次，再向样品瓶中充样至溢流，以水样充满，顶部不留任何空间，封瓶时水样中不能有气泡，瓶壁有气泡时应轻摇瓶壁将气泡赶出；4℃下保存。水样过滤
过滤装置：直径为142mm的Millipore微滤系统； 滤膜：APFF玻璃纤维滤膜；
将25 l（污水、地表水）或40 l（饮用水）滤过水样收集于已洗净的带塞棕色玻璃瓶保存，加入5‰体积的甲醇，以抑制微生物的生长，待富集；
剩余5 l滤过水样用于常规水质分析（250 ml，注意pH值、温度需立即测量）、金属分析（250 ml，加入1 ml硝酸酸化）、氮磷分析（500 ml），均收集于其余备用；悬浮物的收集：将滤过水样的滤膜用铝箔包好，4℃保存。
富集
采用500 mg的HLB固相萃取柱用于水样的富集。先安装好真空抽滤装置及固相萃取装置，HLB柱在使用前依次用二氯甲烷、甲醇、蒸馏水各5 ml清洗，加液后保持5 min，开真空泵抽取液体，处理完后小柱处于活化状态。调节好真空度，使水样过柱的流速恒定在5 ml/min。
富集完毕后，将水抽干。
首先以5 ml甲醇/水（甲醇%=5%）为清洗剂，浸泡5 min后，抽干30 min以上； 然后以10 ml甲醇/二氯甲烷（1:9，v/v）为淋洗剂分三次（4 ml、3 ml、3 ml）进行第一级洗脱，洗脱组分为中等极性至非极性组分；
再以5 ml正己烷/二氯甲烷（2:1，v/v）为淋洗剂进行第二级洗脱，洗脱组分为非极性组分。
洗脱液均收集于K-D浓缩器中。将同一样品的第一级洗脱液集中于一个250 ml烧瓶中，添加3药匙无水硫酸钠，放置过夜；转移出清液后旋蒸浓缩，过无水硫酸钠小柱（装柱见净化部分），用15ml二氯甲烷淋洗脱水，用柔和高纯氮气（注意氮气流量要小，表面刚好产生漩涡即可，以免组分损失）吹蒸并置换溶剂为正己烷。
第二级洗脱液集中于另一个150 ml烧瓶中，旋蒸浓缩并置换溶剂为正己烷。将两级组分合并吹氮浓缩，转移至大容量样品管，定容至6 ml。悬浮物提取
ml二氯甲烷超声提取三次（30 min、30 min、30 min），合并提取液，收集于250 ml烧瓶中，旋转蒸发浓缩至1 ml左右，留待净化。
在干净的50cm长内径为10mm的层析管上用记号笔在12cm和18cm处做上记号，取一个干净漏斗置于层析管顶端。
先用10ml正己烷淋洗层析管，从下端排出至液面刚好浸没石英砂层，此淋洗液废弃。关上开关后，再加入20ml正己烷，用湿法装柱，用药匙依次将12cm硅胶、6cm氧化铝从顶端漏斗加入（硅胶、氧化铝层的上界面分别在12cm、18cm的记号线位置）。
注意在装柱过程中，要不断地加入正己烷以免其黏附在管壁上，并保持正己烷以适当的流速不断地流出，且保证正己烷液面始终高于柱界面（即柱子不能断裂）；同时不断地用吸耳球轻轻敲打滴定管，使硅胶层或氧化铝层紧密。
最后以同样方法再在氧化铝层上装入1cm的无水硫酸钠，用于样品脱水。调节正己烷液面，使其正好处于无水硫酸钠层面之上，关闭开关备用（注意此时管壁上不得粘有固体颗
粒，否则需用正己烷冲洗干净再调节液面）。整个装柱过程中，正己烷可回收循环使用。
Florisil净化柱同样方法装入19cm的Florisil和1cm的无水硫酸钠。无水硫酸钠小柱则选用30cm层析柱，仅装入5~10cm无水硫酸钠即可。
将1ml待净化的二氯甲烷富集样品用滴管从K-D浓缩器移入净化柱中，浸泡5min以上，保证样品与净化柱充分接触交换。
第一级洗脱：以15ml正己烷分三次洗涤盛有二氯甲烷样品的K-D浓缩器，均用滴管移入净化柱中，然后以60滴/min左右的流速流出，直到液面刚好处于无水硫酸钠层面之上，关闭开关。洗脱液用K-D浓缩器收集，此为非极性的烷烃组分。
第二级洗脱：进一步以70ml正己烷/二氯甲烷（7:3，v/v）混合液淋洗净化柱，控制流速为90滴/min左右，即成滴而不连续流。洗脱液用100mL鸡心瓶收集，此为中等极性至非
极性的芳烃组分。
第三级洗脱：进一步以30ml甲醇淋洗净化柱，洗脱液用50或100ml鸡心瓶收集，此
为极性组分。
净化样品的浓缩
15ml正己烷洗脱液直接用柔和高纯氮气浓缩定容至1ml；
70ml正己烷/二氯甲烷（7:3）混合溶剂洗脱液首先用旋转蒸发仪浓缩至1ml左右；再用10ml正己烷分三次洗涤鸡心瓶，转移至K-D浓缩器；然后再用柔和高纯氮气浓缩定容至1ml；
30ml甲醇洗脱液与混合溶剂洗脱液浓缩方法相同，也定容至1ml； 首先进行化学分析，剩余样品吹干置换生物实验溶剂。正己烷湿法装柱，10 g Florisil＋1-2cm无水硫酸钠。
预先用10 ml正己烷洗柱，放出舍弃，使液面恰好浸没无水硫酸钠层；再将2 ml溶于正己烷的样品加载，并用1-2 ml正己烷冲洗样品瓶，同样加入净化柱。依次用以下四种混合洗脱剂洗脱：对有机磷的各级洗脱回收率见表1。
Fraction I.50 ml 6% 乙醚in 正己烷； Fraction II.50 ml 15% 乙醚 in 正己烷；
Fraction III.50 ml 50% 乙醚 in 正己烷； Fraction IV.50 ml 100% 乙醚。
表1.对有机磷的各级洗脱回收率
名称
内吸磷 乙拌磷 二嗪农 马拉硫磷 乙基对硫磷 甲基对硫磷 谷硫磷（保棉磷）
乙硫磷
100ND
各级洗脱回收率 2100 5 100 100ND
39520 ND
480 ND
正己烷湿法装柱，4 g硅胶＋2 g无水硫酸钠。
预先用10 ml正己烷洗柱，放出舍弃，使液面恰好浸没无水硫酸钠层；再将2 ml溶于正己烷的样品加载，然后再以10 ml正己烷洗柱，放出舍弃。
依次用以下四种混合洗脱剂洗脱：各级洗脱回收率见表1。
Fraction I.10.0 ml 15% 甲苯 in 正己烷； Fraction II.10.0 ml 40% 甲苯 in 正己烷； Fraction III.10.0 ml 75% 甲苯 in 正己烷； Fraction IV.10.0 ml 15% 2-丙醇 in 甲苯。
表1.各级洗脱回收率
名称
2-氯酚 2-硝基苯酚 苯酚 2,4-二甲基苯酚 2,4-二氯酚 2,4,6-三氯酚 4-氯-3-甲基苯酚
五氯酚 4-硝基苯酚
正己烷湿法装柱，10 g Florisil＋1-2cm无水硫酸钠。
预先用10 ml正己烷洗柱，放出舍弃，使液面恰好浸没无水硫酸钠层；再将2 ml溶于正己烷的样品加载，并用1-2 ml正己烷冲洗样品瓶，同样加入净化柱。用100 ml正己烷洗脱。
重铬酸钾洗液的配置方法
称取20g重铬酸钾，加入40mL水，360mL浓硫酸，采用玻璃棒充分混匀。
5075
各级洗脱回收率% 2 9090 95 95 50 84 201 9 10 7 1141
49090
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