分子生物学实验室常用试剂配方ProbeGene(精)由刀豆文库小编整理，希望给你工作、学习、生活带来方便，猜你可能喜欢“实验室常用试剂配方”。
分子生物学常用试剂配制与保存 一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine : 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存 于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine : 溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate: 将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤 膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA :加 100mg 的牛血清蛋白(组分 V 或分子 生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直 至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后 分装成小份贮存于-20℃。
8mol/L乙酸钾(potaium acetate: 溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate:
溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml。
0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶 于水中,定容至 1L。
1mol/L HCl: 加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPTG: 溶解 250mg 的 IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷 于 10ml 水中, 分成 小份贮存于-20℃。
100mmol/L PMSF: 溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟 于足量的异丙醇中, 定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶 K(proteinase K: 将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶 K 完 全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/ml Rnase A(无 DNase : 溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0。溶解后于水浴中煮沸 15min , 使 DNA 酶失活。用 1mol/L的 Tris-HCl 调 pH 至 7.5,于-20℃ 贮存。(配制过程中要戴手套
10N 氢氧化钠(NaOH : 溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌 , 氢 氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。
100%三氯乙酸(TCA : 在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水, 用磁力搅拌器搅拌直至完 全溶解。(稀释液应在临用前配制
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷: 溶解 25mg 的 X-gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺(DMF , 用铝箔包裹装液 管,贮存于-20℃。
10%SDS(十二烷基硫酸钠: 称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅 拌直至完全溶解。用水定容至 1L。
2mol/L山梨(糖醇(Sorbitol : 溶解 36.4g 山梨(糖醇于足量水中使终体积为 100ml。DEPC(焦碳酸二乙酯处理水: 加 100ul DEPC 于 100ml 水中, 使 DEPC 的体积分数为 0.1%。在 37℃ 温浴至少 12h ,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min ,以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺(deionized formamide: 直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中, 用磁 力搅拌器轻轻搅拌 1h ,可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸 过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃ 贮存(防止氧化。
苯酚 /氯仿 /异戊醇: 将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇(24:1均匀混合后,移 入棕色玻璃瓶中 4℃ 保存。
PBS Buffer: 组份 :137 mM NaCl, 2.7mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配置方法(1L: 1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中。NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2.向烧杯中加入约 800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4,然后加入去离子水将溶液定容至 1L。4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述 PBS Buffer中无二价阳离子, 如需要, 可在配方中补充 1mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。
磷酸缓冲液(phosphate buffer:
按照下表所给定的体积, 混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱 和 1mol/L 磷酸氢二钠(双碱 贮液, 获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的 磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O贮液:溶解 138g 于足量水中,使终体 积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4贮液 :溶解 142g 于足量水中 使终体积为 1L。
1mol/L 磷酸二氢钠(ml 1mol/L 磷酸氢二钠(ml 最终 pH 值 77 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9
7.0 7.1 7.2 Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer: 将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中,再根据所要求的 pH(25℃下 加一定量的浓盐酸(11.6N ,用水调整终体积至 1L。
浓盐酸的体积(ml pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 TE(用于溶解和贮存 DNA 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA
水
1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0, 25℃ 200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 98.8ml 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide: 小心称取 1g 溴化乙锭,转移到广口瓶中,加 100ml 水,用磁力搅拌器 搅拌直到溶解,分装成小份 4℃避光保存。
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE 缓冲液
成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L 200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 补足 1L 5×Tris-硼酸(TBE 缓冲液
成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸ml的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 补足 1L 6×DNA Loading buffer蔗糖凝胶上样液(室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水
1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0 4g 补足到 10ml
10×DNA Loading buffer(终止反应 十二烷基硫酸钠 /甘油凝胶上样液(室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝 0.2%二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 100ul 10% SDS 5ml 补足到 10ml 30%(W/V Acrylamide 组份浓度 30%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法 : 1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g 2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水,充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L ,用 0.45μm 滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。
注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积 累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有 可能含有少量的未聚合成份。
40%(W/V Acrylamide 组份浓度 40%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法
1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g 2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水,充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L ,用 0.45μm 滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。
注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收, 其作用有 积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒,但也应谨慎操作,因 为有可能含有少量的未聚合成份。
10%(W/V过硫酸铵
组份浓度 10%(W/V过硫酸铵 配制量 10mL 配置方法 1.称取 1g 过硫酸铵。
2.加入 10mL 的去离子水后搅拌溶解。3.贮存于 4℃。
注意:10%过硫酸胺溶液在 4℃ 保存时间可使用 2周左右, 超过期限 会失去催化作用。
考马斯亮蓝 R-250染色液
组份浓度 0.1%(W/V考马斯亮蓝 R-250, 25%(V/V异丙醇, 10 %(V/V冰醋酸 配制量 1L 配置方法
1.称取 1g 考马斯亮蓝 R-250, 置于 1L 烧杯中。2.量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。3.加入 100mL 的冰乙醋酸,均匀搅拌。4.加入 650mL 的去离子水,均匀搅拌。5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液
组份浓度 10%(V/V醋酸, 5%(V/V乙醇 配制量 1L 配置方法
1.量取下列溶液,置于 1L 烧杯中。醋酸 100mL
乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。显影液
组份浓度 0.005%(V/V柠檬酸, 0.02%(V/V甲醛(SDS-PAGE银 氨染色用 配制量 1L 配置方法
1.称取下列试剂,置于 1L 试剂瓶中。柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入 1L 去离子水后,摇动混合后溶解。3.室温保存。5×Tris-GlycineBuffer 组份浓度 0.125M Tris , 1.25M Glycine, 0.5%(w/v SDS(SDS-PAGE 电泳缓冲液 配制量 1L 配置方法
1.称取下列试剂,置于 1L 烧杯中。Tris 15.1g
Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约 800mL 的去离子水,搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 1L 后,室温保存。三.常用培养基 LB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用 1N NaOH(~1ml 调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。
SOB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份,高压灭菌。培养基冷却到室 温后,再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L氯化镁。
SOC 培养基
成分、方法同 SOB 培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了 在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L氯化镁外, 再加 2ml 灭菌 的 1mol/L葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到 100ml , 用 0.22um 的滤膜过滤除菌。
TB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60℃ ,再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的 溶 液(2.31g 的 KH2PO4和 12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为 100ml。高压灭菌或用 2×YT培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用 1N NaOH(~1ml 调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。
YPD 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营 养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨酸, 因为 YPD 培养基是色氨酸限制 型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin(100mg/ml
溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中, 最后定容至 10ml。分装成小份 于-20℃ 贮存。常以 25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素(carbenicillin(50mg/ml 溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成 小份于-20℃ 贮存。常以 25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养 基。
卡那霉素(kanamycin(10mg/ml 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中, 最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicillin(100mg/ml 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃ 贮存。常以 37.5ug/ml终浓度与 100ug/ml氨苄青霉素一起添加于 生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol(25mg/ml 溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中, 最后定容至 10ml。分装成小份 于-20℃ 贮存。常以 12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素(streptomycin(50mg/ml 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至 10ml。分装
成小份于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养 基。萘啶酮酸(nalidixic acid(5mg/ml 溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小 份于-20℃ 贮存。常以 15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline(10mg/ml 溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无 水乙醇,定容至 10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光, 于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
五、核酸及蛋白质常用数据
1.核苷三磷酸的物理常数 化合物 分 子 量
λmax(pH7.0 1摩尔溶液(pH7.0 中 λmax 时的最大吸 收值
OD 280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494
259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2.常用核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数 分子量
λDNA 48502(双链环状 3.0×107 pBR322 4363(双链 2.8×106 28SrRNA 4800 1.6×106 23SrRNA 3700 1.2×106 18SrRNA 1900 6.1×105 19SrRNA 1700 5.5×105 5SrRNA 120 3.6×104 tRNA(大肠杆菌 75 2.5×104 3.常用核酸蛋白换算数据(1重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g(2分光光度换算: 1A 260双链 DNA=50μg/ml 1A 260单链 DNA=30μg/ml
1A 260单链 RNA=40μg/ml 4.常用蛋白质分子量标准参照物
(1高分子量标准参照(2中分子量标准参照(3低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶 B 97, 400 碳酸酐酶 31, 00 肌球蛋白 212, 000 牛血清白蛋白 66, 200 大豆脻蛋白酶 21, 500β-半 乳 糖 甘
酶 B 116, 000 谷氨酶脱氢酶 55, 000 抑制剂
磷酸化酶 B 97, 400 卵白蛋白 42, 700 马心肌球蛋白 16, 900牛 血 清 白 蛋 白
66, 200 醛缩酶 40, 000 溶菌酶 14, 400过氧化氢酶 `57, 000 碳酸酐酶 31, 000 肌球蛋白(F1 8, 100 醛缩酶 40, 000 大豆脻蛋白酶 21, 500 肌球蛋白(F2 6, 200 抑制剂 肌球蛋白(F3 2, 500 溶菌酶 14, 400 5.常用 DNA 分子量标准参照物
λDNA/HindⅢ λDNA/EcoRⅠ λ/HindⅢ +EcoRⅠ pBR322/HaeⅢ 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 1375 974 831 564 125 213 192 184 124 21 18 11 7 2.常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 浓贮存液（每升）50×：242g Tris 碱 57.1ml 冰乙酸 100ml EDTA(pH8.0 Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 碱 15.5ml85%
磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 5×：54g Tris 碱 27.5 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 碱性缓冲液 b Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA 0.5mol/L
六、常用缓冲液 1．磷酸缓冲液（1）25℃下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L K2HPO4(ml 8.5 13.2 19.2 27.8 38.1 49.7 61.5 71.7 80.2 86.6 90.8 94.0 ※ ※ 0.002mol/L EDTA 1mol/L KH2PO4(ml 91.5 86.8 80.8 72.2 61.9 50.3 38.5 28.3 19.8 13.4 9.2 6.2 说明： Tris-甘氨酸 c 1×:50mmol/L NaOH 1mmol/L EDTA 1×:25mmol/L Tris 250mmol/L 甘氨酸 0.1% SDS 1×:5ml 10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0 5×:15.1g Tris 94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）50ml 10% SDS(电泳级 ①TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下 用玻璃瓶保存 5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以 1×TBE 作为使用液（即 1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电 泳。但 0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖 胶电泳都以 1：10 稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量 通常较大，需要使用 1×TBE 以提供足够的缓冲容量。②碱性电泳缓冲液应现用现配。③Tris-甘氨酸缓冲液用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。2×SDS 凝胶加样缓冲液： 100mmol/L Tris·HCl(6.8 200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含 DTT 的 2×SDS 凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取（2）25℃下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L Na2HPO4(ml 1mol/L NaH2PO4(ml 7.9 12.0 17.8 25.5 35.2 46.3 57.7 68.4 77.4 84.5 89.6 93.2 92.1 88.0 82.2 74.5 64.8 53.7 42.3 31.6 22.6 15.5 10.4 6.8 1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。3.凝胶加样缓冲液 缓冲液类型 6×缓冲液 0.25%溴酚蓝 Ⅰ 0.25%二甲苯青 FF 40%（W/V）蔗糖水溶液 4℃ 贮存温度 ※: 用 蒸 馏 水 将 混 合 的 两 种 1mol/L 贮 存 液 稀 释 至 1000ml，根 据 Henderson-Haelbalch 方程计算其 pH 值： pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体]在此，pK’=6.86(25℃。徐州溥博生物科技有限公司 www.daodoc.com 6 0.25 溴酚蓝 Ⅱ 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(Ficoll400 0.25%溴酚蓝 Ⅲ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 0.25%溴酚蓝 Ⅳ 40%(W/V蔗糖水溶液 碱性加样缓冲
液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(Ficoll400 Ⅴ 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均 匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而 使加样操作更为便利，含有 在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的 速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在琼脂糖浓度为 0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化 的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲 酚绿作为示踪染料，因为在碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。4．各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值（25℃）7．1 7．2 7．3 7．4 7．5 7．6 7．7 7．8 7．9 8．0 8.1 8.2 8.3 0.1mol/L HCl 的体积 45．7 44．7 43．4 42．0 40．3 38．5 36．6 34．5 室温 4℃ 4℃ 4℃ 5.常用缓冲液的 pKa 值 缓冲液 Tris a b 分子量 12.1 283.3 209.3 304.3 195.2 pKa 值 8.08 7.47 7.15 6.76 6.09 缓冲范围 7.1～7.9 7.2～8.2 6.6～7.8 6.2～7.3 5.4～6.8 HEPES MPOSc PIPES MES e d a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。32．0 29．2 26.2 22.9 19.9 6．温度对常用缓冲液 pH 的影响 缓冲体系 Mes Ada pKa(20℃ 6.15 6.60 △pKa/10℃-0.110-0.110 徐州溥博生物科技有限公司 www.daodoc.com 7 PiPes Aces Bes Mops Tes Hepes Tricine Tris Bicine Glycylglycine 6.80 6.90 7.15 7.20 7.50 7.55 8.15 8.30 8.35 8.40-0.085-0.200-0.160-0.013-0.200-0.014-0.210-0.310-0.180-0.280 细级 超细 Sephadex G-75 20～80 10～40 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2 40～120 3,000～ 1,000～ 12 ～ 3.92 7.5±0.5 15 24 3 15.86 ～ 超细 10～40 70,000 950,000 Sephadex G-100 40～120 4,000～ 1,000～ 15 ～ 超细 10～40 1,500,000 150,000 20 溶胀最 少平衡 Sephadex G-150 20 ～ 柱头压力 40～120 5,000～ 1,000～ 30 18 ～ 超细 10～40 400,000 150,000 22 Sephadex G-200 15.0±1.5 72 5 3.53 0.88 ～ 10.0±1.0 48 5 9.41 2.35 ～
七、常用凝胶的技术参数 1．葡聚糖凝胶的某些技术数据 床体积 分子量分级范围 毫升/ 干颗粒直径 种类（μ）葡 聚 糖
克干分 得水值 肽及球形 蛋白质 分子）Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex G-25 100～300 粗级(≈5 ～ 100 目 1,000～ 50～150 中级(≈100～200 100～ ～1500 1500 3.5 2.5 ～ 1.5±3.5 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1（线 性 子筛 时 间（h）（kPa）沸 室 水 温 浴(2.5cm 直径柱 3 1 40～120 5000～ 1000～ 30 ～ 40 3 1 10～40 800,000 200,000 20 ～ 20.0±2.0 25 72 5 0.39 1.57 ～ 2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 排阻的下限 型号(分子量 Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 6 2 4～6 5,000 5,000 1.5±0.2 Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 1,600 3,600 4,600 10,000 30,000 60,000(分子量 200～2,000 500～4,000 1,000～5,000(ml/g 干凝胶 3.8 5.8 8.8 时间(室温,h 2～4 2～4 2～4 2～4 10～12 10～12 分级分离范围 膨胀后的床体积 膨 胀 所 需 最 少 目 5,000～17,000 12.4 20,000～50,000 14.9 30,000～70,000 19.0 40,000 ～ 19.0 100,000 20 细级 ～ 800(≈200～ 400 目 超细 Sephadex G-50 粗级 中级 10～40 Bio-gel-P-100 100,000 24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000 24.0 80,000 ～ 34.0 200,000 24 100～200 50～150 1,500～ 500～ Bio-gel-P-200 200,000 48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000 40.0 48 徐州溥博生物科技有限公司 www.daodoc.com 8 3．琼脂糖凝胶的技术数据 琼脂糖含量 排阻的下限 分级分离的范围（分 型号 %（W/W）（分子量）子量）Sepharose 4B Sepharose 2B Sagavac 10 Sagavac 8 Sagavac 6 Sagavac 4 Sagavac 2 Bio-gel A-0.5M Bio-gel A-1.5M Bio-gel A-5M Bio-gel A-15M Bio-gel A-50M 4 2 10 8 6 4 2 10 8 6 4 2 2.5×105 7×10 2×10 5 7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 生产厂家 0.3×10 ～3×10 2×10 ～25×10 6 6 6 凝胶浓度（%）3.5 溴酚蓝 100bp 65bp 45bp 20bp 15bp 12bp 二甲苯青 FF 460bp 260bp 160bp 70bp 50bp 45bp Pharmacia 6 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0 1×104～2.5×105 2.5×10 ～7×10 5×10 ～2×10 4 6 4 5 6 15×10 6 2×10 ～15×10 5 6 Seravac
八、遗传密码 密码子的第二位 150×106 0.5×10 1.5×10 5×10 6 6 5×105～15×107
15×106 50×10 6 4×104～15×106 1×10 ～50×10 6 6 5 6 Bio-Rad 6 UUA U Leu UCA Ser UAA（石）终 赭 UGA Bio-gel A-150M 1 150×10 1×10 ～150×10 4．各处凝胶所允许的最大操作压 凝胶 Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 9.8 9.8 9.8 9.8 4.9 最大静水压（kPa）密码 子的 第一 位（5’ CUG 端）AUU AUC A AUA AUG GUU GUC G GUA GUG Ile Ile Ile Met Val Val Val Val ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG Leu CCG Pro CAG CUU CUC C CUA Leu Leu Leu CCU CCC CCA Pro Pro Pro CAU CAC CAA UUG Leu UGG Ser UAG（珀）His His Gln Gln Asn Asn Lys Lys Asp Asp Glu Glu 5．琼脂糖凝胶浓度与线性 DNA 分辨范围 凝胶浓度（%）0.5 0.7 1.0 1.2 1.5 2.0 线性 DNA 长度（bp）1000～30000 800～12000 500～10000 400～7000 200～3000 50～2000 GGG Gly 6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 凝胶浓度（%）5．0 6．0 8．0 10．0 20．0 溴酚蓝 35bp 26bp 19bp 12bp 8bp 二甲苯青 FF 140bp 106bp 75bp 55bp 28bp 徐州溥博生物科技有限公司 www.daodoc.com 9
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